1，标准品的制备

标准品的制备是非常复杂的问题，也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。以下讨论的是实验室标准品(或商品化试剂中标准品)的制备。

（1）基质的制备：如前所述，作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品，应用不含被测物质的零血清制备，以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难，所以有些标准品用适当的缓冲液制备，并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其与样品的介质环境相近。

零值血清的制备方法有：

A、吸附法：血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这种方法简便，但待测物质难以清除干净，而且大分子活性物质不能用此法进行制备。

B、反复冻融法：对大分子活性物质可选用低值血清，经反复冻融使被测物质失活。用这种方法可使某些蛋白类激素大部分失活，但也难以得到真正的零值血清。

C、亲和层析法：用特异性抗体制备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这种方法可以得到高质量的零值血清，但本法比较复杂而且成本也高。

（2）标准物纯品的选择：应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作标准品。其中免疫纯尤为重要，在标准品中不应含有与被测物质有交叉反应的物质。

（3）标准品的制备：先用零值血清配置高浓度的标准品，然后根据实验系统的要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成符合预定要求的，由不同浓度组成的系列标准品。

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2，标准品的鉴定

（1）免疫活性的鉴定：选用高特异性的抗血清分别作公认标准品(如WHO的国际参考品或国家标准品)的待鉴定标准品的剂量反应曲线，并观察两条曲线的平行性。如两条剂量反应曲线平行，说明两种物质对同一抗体有相同的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量反应曲线不平行，说明两种物质具有异质性，因而这一待鉴定的标准品是不能使用的。

（2）浓度的标定：用已鉴定过的，免疫活性合格的标准品，与公认的标准品作浓度相同的剂量反应曲线。此时，两条剂量反应曲线应该是基本重合的。如果两者平行但不重合，则取两条剂量反应曲线的50%结合处的相应剂量( ED50 )计算二者的换算系数，然后调整待鉴定标准品的浓度，直至使两条剂量反应曲线完全或基本重合为止。

3，标准品的计量

许多小分子抗原或半抗原已能得到纯品或进行合成，它们对作为标准品的要求可以得到基本的满足，其计量多直接用单位体积中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最近WHO推荐用质量单位取代重量单位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。对大分子的活性物质则比较复杂。由于得不到绝对的纯品，故很难直接用单位体积中的重量或单位体积中的质量计量。因此，常用该物质的生物活性单位表示，如IU / L、mIU / L等。

4，标准品的稳定性与保存

如前所述，为保证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保证能在较长时间内使用。因此，每批标准品应在适当的条件下保存，使其免疫活性和浓度保持稳定。

4.1 影响标准品稳定的因素：

（1）基质中的酶、细菌污染、pH的变化、氧化、潮湿等因素都可以导致标准品的变性，而且这些变化可因高温和光照加速。

（2）在保存过程中发生聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。

（3）容器内壁的吸附作用和溶剂的蒸发可造成标准品浓度的改变。

（4）保存条件不适当也可以影响标准品的稳定性，如反复的冻融可降低标准品的免疫活性等。

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4.2 标准品的保存方法

（1）冷冻干燥法：冷冻干燥对标准品的浓度和免疫活性无明显的影响，是目前最常用的保存方法。冷冻干燥制品在低温下，可在较长的时间内保持稳定。但应用冷冻干燥制品时，复溶体积的准确度十分重要。因此，要用经过校准的量器准确的复溶，以减少标准品的浓度误差。

（2）在标准品中加一定量的防腐剂可减少细菌污染的影响。

（3）密闭真空保存或充入惰性气体等方法也可以增加标准品的稳定性。目前最常用的方法是：在标准品中加入少量的防腐剂(如0.1%叠氮钠或0.1%硫柳汞)，冷冻干燥后密封，并在低温下保存。但应注意，一旦复溶后应放低温保存，并不得反复冻溶。复溶后的标准品其有效期明显缩短，一般不超过6～8周，有些物质可能更短。