在我们免疫比浊试剂开发过程中,你们有没有遇到这样的问题:“高值区分度比较大时,低端就区分不开;高端区分度比较大不开时,低端却区分的比较明显”今天带着这个问题和大家探讨一下聚乙二醇(PEG)对免疫比浊试剂是如何影响的。
在标记微球和样本反应时,我们需要提前准备好反应环境,这里的反应环境就是我们通常说的R1试剂,没有R1试剂的参与,整个反应将会一塌糊涂,或者说根本不行!
在R1试剂中主要包括这几个部分,包括缓冲液、离子、防腐剂、稳定剂、PEG,有的时间也会添加阻断剂在里面,PEG在这里面起着关键作用,用量的多少直接影响着抗原抗体反应的成败!PEG无毒、无刺激性,具有良好的水溶性,并与许多有机物组份有良好的相溶性。它们具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等,它在免疫比浊法中对抗原抗体反应有显著影响,主要体现在以下几个方面:
1、增加试剂灵敏
PEG可以加快反应速度,稳定抗原-抗体复合物。在反应体系中加入适量的PEG(通常浓度为3% ~ 4%),可以提高检测信号的强度和灵敏度。PEG能够增加某些抗原的溶解性,从而促进抗原与抗体之间的结合,增强免疫反应的灵敏度。PEG可以用于将多个抗原连接在一起,形成多价结构,从而增强特异性和亲和力,促进更强烈的免疫反应。PEG修饰的抗原或抗体往往具有更好的稳定性,这对于长期储存或在复杂生物环境中检测时尤为重要。
这里要特别注意:当浓度非常低时,不同浓度的校准品将检测出的光电值几乎一样;浓度升高时,不同浓度的校准品将检测出的光电值有所不同(这时候高端区分比较明显,低端区分不太明显);随着浓度越来越高,高端区分慢慢变得不明显比较明,而低端区分变的比较明显。
2、防止非特异性沉淀
通常PEG的分子量较大,可以有效防止血清、血浆中其他蛋白质(如IgM、α2巨球蛋白、脂蛋白)非特异性沉淀,避免形成“伪浊度”,影响准确性和空白限。PEG的空间位阻效应可以减少抗体与其他大分子或细胞表面的非特异性结合,提高信号的特异性和准确性。
3、维持抗体过量
在抗原过量的情况下,PEG可以促进抗原-抗体复合物的形成,避免光散射减少,从而保持较高的浊度。
适用的pH值范围:
PEG的使用需要确保反应液的pH值在6.5~8.5之间,以形成稳定的复合物。
操作注意事项:
在使用PEG时,需要注意其浓度不宜过高,否则可能会导致非特异性聚集和微球自身凝聚,影响测定结果的准确性。
总结来说,PEG通过增快反应速度、稳定复合物、防止非特异性沉淀等方式,显著提高了免疫比浊法测定的灵敏度和准确性。但在使用时需要严格控制PEG的浓度和操作条件,以避免不良影响。